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    DNA甲基化分析方法中BSP和MSP的區別

    DNA甲基化參與一系列重要生物學(xué)過(guò)程,包括早期胚胎發(fā)育、基因組印記、X 染色體失活、重復序列的沉默以及許多人類(lèi)疾?。ㄈ绨l(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調等)過(guò)程中發(fā)揮重要作用,DNA 甲基化也有助于闡明這些重要的生命過(guò)程背后隱藏的奧秘。

    DNA甲基化是表觀(guān)遺傳修飾的主要方式,它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase,Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,它并不改變DNA的一級結構,卻在細胞的發(fā)育、基因的表達、及基因組的穩定性中起著(zhù)重要的作用。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現象,而啟動(dòng)子CpG島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。因此,基因啟動(dòng)子甲基化檢測在臨床診斷(如甲基化檢測與CT相結合)等方面具有很高的應用價(jià)值。

    目前甲基化分析有很多方式,其中重亞硫酸鹽處理法最為常見(jiàn),基于此原理也存在不同分析方法,而B(niǎo)SP和MSP是兩種不同的甲基化分析方法。

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    亞硫酸氫鹽修飾后測序法 (bisulfite sequencing PCR, BSP):該方法是通過(guò)對基因組DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽處理,非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉變成尿嘧啶,在隨后的PCR反應中尿嘧啶轉變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基,在反應完成時(shí)被保留;然后在非甲基化區域設計引物進(jìn)行PCR擴增,我們將擴增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序,就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。

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    甲基化特異性的PCR法 (methylation-specific PCR,MSP):該方法是通過(guò)對基因組DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽處理,然后在甲基化區域設計甲基化特異性的引物 (M Primer) 和非甲基化特異性的引物 (N Primer),使用M Primer和N Primer分別進(jìn)行PCR擴增,檢測此MSP擴增產(chǎn)物,如果使用M Primer能擴增出片段,則說(shuō)明該被檢測的位點(diǎn)存在甲基化;若用N Primer擴增出片段,則說(shuō)明被檢測的位點(diǎn)不存在甲基化。

    兩種甲基化分析方法的區別

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